Ejemplos ?
La secuencia de E2 más utilizada como antígeno es la que carece del segmento transmembrana C-terminal, la que se secreta al sobrenadante de cultivos artificiales de células de insecto, genéticamente transformadas mediante el sistema de baculovirus o más recientemente se ha producido el antígeno vacunal E2 en la leche de cabras genéticamente modificadas que funcionan como reactores vivos.
En este caso, podemos aceptar dos variedades de producir estas proteínas: en primer lugar, podemos poner esas células en un medio especial e inocular con baculovirus, que no resultan malévolos para los humanos (no los infectan).
En estos casos la proteína es secretada al sobrenadante de cultivo celular, el baculovirus es inactivado y la proteína E2 contenida en el medio es adyuvada mediante emulsión oleosa o se purifica directamente de la leche y se formula en un adyuvante oleoso.
Se trata de un cultivo celular especial, cuya principal aplicación consiste en el cultivo de baculovirus de cara a la expresión y purificación de proteína recombinante.
La importancia del cultivo de estas líneas celulares radica en su aplicación en la expresión de gran cantidad de proteínas recombinantes mediante el desarrollo del vector de expresión de baculovirus.
Con el fin de conseguir baculovirus recombinantes se realiza la cotransfección de células Sf9 con el plásmido pAcGP67-C (este plásmido contiene la secuencia señal gp67 que permite su liberación extracelular), que contiene el gen de interés insertado, junto al DNA del virus linealizado.
Para ello se sigue el protocolo de transfección BD BaculoGold. Las propiedades de los baculovirus generados son: Modificaciones post-traduccionales.
La purificación es sencilla si es extracelular: ausencia de proteínas en el medio (6xHis) Después de la cotransfección o de la purificación de virus, el baculovirus recombinante debe ser amplificado para obtener un elevado título de virus en la disolución que permite la adecuada infección de las células de insecto y expresión de proteína recombinante en dichas células.
Se mantienen en cultivo en suspensión para la propagación de baculovirus y producción de proteínas recombinantes o cultivo en monocapa para cotransfección o ensayos en placa para la purificación de baculovirus recombinantes.
En los cultivos se ha detectado la presencia de agentes patógenos tales como los virus Baculovirus penaei...
Esta hipótesis está apoyada por la distinta morfología de Ichnovirus y Bracovirus, lo que sugiere diferentes virus ancestrales para las dos familias. Los primeros tienen notables similitudes con ascovirus, mientras que los segundos pueden estar relacionados con los baculovirus.
Estas proteínas se obtienen a partir de un proceso de ingeniería genética donde los genes que codifican para estas proteínas se seleccionan para poder clonar y expresar en huéspedes alternativos tales como bacterias (Escherichia coli), levaduras (Saccharomyces Cerevisiae) o Baculovirus.